服务介绍：

　　荧光定量PCR是通过荧光染料(SYBR Green)或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。可以用于检测miRNA的基因表达水平。

　　实验结果展示：

　　1、扩增曲线

　　2、熔解曲线

　　3、表达倍数

　　实验流程：

取材-RNA提取逆转录成cDNA-QPCR扩增-数据分析-发报告

miRNA采取特异性逆转录，采用的是茎环法

　　送样运输要求：

1. 样品处理

a) 动物组织：常规组织100mg，脂肪组织，结缔组织，纤维化组织适当增加。将组织剪切成合适大小后（建议组织块长宽高均不大于0.5 cm），然后迅速完全浸泡于5～10倍体积的RNAsolid^TM试剂中。（注意：已浸入RNAsolid^TM试剂中的组织经平衡一段时间后，可从溶液中取出，切成更小的组织块，再重新放回RNAsolid^TM试剂中；有些比较弱的液体渗透性组织如骨头等，不适合用RNAsolid^TM试剂进行RNA保护。）

b) 植物组织：新鲜的叶、果肉、种子等最少100 mg。将嫩叶，嫩茎组织切成合适的大小（建议长宽高均不大于0.5 cm）后，然后迅速完全浸泡于5～10倍体积的RNAsolid^TM试剂中。（注意：某些植物组织天生具有的屏障，如叶子表面的蜡层可阻碍RNAsolid^TM试剂的渗透，对于此类组织，通常需破坏这些屏障层以允许溶液的浸透。）

c) 细胞等样本：收集不小于10^6个细胞的沉淀（用PBS清洗1-2次）。之后迅速加入5～10倍体积的RNAsolid^TM试剂。

d) 酵母、细菌等样本：离心弃上清，收集小米粒大小的单菌体沉淀，然后迅速加入适量的RNAsolid^TM试剂完全浸没菌体沉淀。

e)全血：最少1 mL新鲜血液EDTA抗凝管，-20度运输。

f)血清：最少1 mL，干冰运输。

g) RNA样品： OD260/280为1.8-2.0，浓度≥100 ng/μL，体积≥20μL，干冰运输。

h)cDNA（必须能检测miRNA基因）：cDNA原液≥20 μL，干冰运输。

2. 样品保存及运输

加入有RNAsolid^TM试剂的样本可在37℃保存1～2天，2天以后部分组织中的RNA会开始降解。室温（25℃）稳定保存1周，不会有明显的RNA降解发生。大部分样品置于RNAsolid^TM试剂中，4℃条件下可稳定保存1个月，不会有明显的RNA降解发生。长期存放可先将保存在RNAsolid^TM试剂中的样本4℃浸透过夜，然后将RNAsolid^TM试剂吸出弃去，再将样本放入-20℃或-80℃长期稳定保存3～5年。