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mPTP:是线粒体内外膜之间的一组蛋白复合体,是由外膜的电压依赖的阴离子通道(VDAC)、内膜的腺嘌呤核苷转位蛋白(ANT)以及亲环素D等组成。线粒体通透性转换孔(mPTP)在细胞的生存、凋亡中扮演着重要角色,它涉及缺血/再灌注、肿瘤、衰老、神经变性等多个领域。
检测手段
线粒体膜通道孔(MPTP)荧光检测
实验步骤
纯化线粒体样品,样本的一系列处理:
选择下列方式之一进行操作:
1. 使用(共聚焦)荧光显微镜观察(定性检测):
①移取10微升上述悬液到载波片上,盖上盖玻片
②激发波长488nm,散发波长505nm――
绿色荧光减弱,表明膜通道孔活性(MPTP)增强
2. 或使用荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测(定量检测):
①移取100微升上述悬液到100微升比色杯或黑色96孔板
②即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪:激发波长488nm,散发波长505nm――
RFU降低,表明膜通道孔活性(MPTP)增强
实验周期及交付标准
1. 实验周期:2-3周
2. 交付标准:荧光图片、比值、实验报告(实验步骤、试剂、仪器)
需确认的信息
1. 样本种属及类型(组织还是细胞)
2. 样本数量
3. 是否提供探针
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