服务介绍:
EdU(5-Ethynyl-2’- deoxyuridine)是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在复制的DNA分子中,通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应快速检测细胞DNA复制活性,适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面。
实验流程:
1.每孔加入2 mg/mL甘氨酸,脱色摇床孵育5分钟后,弃甘氨酸溶液;
注:作用是中和多聚甲醛,当采用其他方式进行细胞固定时可省略此步骤;
2.每孔加入100 μL PBS,脱色摇床清洗5分钟,弃PBS;
3.每孔加入100μL渗透剂(0.5% TritonX-100的PBS)脱色摇床孵育10分钟;PBS清洗1次,5分钟。
注:当实验需要进行其他抗体染色,或由于某些细胞类型对染料的吸附性较高,可能需要增强细胞膜通透性。
4.每孔加入100 μL的1X Apollo®染色反应液,避光、室温、脱色摇床孵育30分钟后,弃染色反应液;
5.加入100 μL渗透剂(0.5% TritonX-100的PBS)脱色摇床清洗2~3次,每次10分钟,弃渗透剂;
6.(加强)每孔每次加入100 μL甲醇清洗1~2次,每次5分钟;PBS清洗1次,每次5分钟。
注:由于某些细胞对染料的吸附性较高,需采用加强方式洗脱以降低染料背景。
染DAPI,封片,镜检。
送样运输要求:
1.组织样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上,常温运输送样。
2.石蜡切片常温保存运输
3.冰冻切片-20℃保存运输
4.细胞爬片固定液浸泡,4℃保存运输