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肝硬化动物模型

发布者:admin发布时间:2022-06-29浏览量:返回上级

造模机制

给予动物具有肝毒性的化学物质,致使机体发生慢性肝脏损害,最终导致肝硬化。目前应用较多的有四...carbon tetrachloride, CCl4)、硫代乙酞胺(thioacetamide,TAA)、二甲基ya硝胺(nitrosodimethylamine,DMN)

 

CCl4是诱导实验动物产生肝纤维化和肝硬化最广泛使用的化学性肝毒物。CCl4经肝微粒体内依赖于细胞色素P450的氧化酶CYP2E1激活后。产生自由基CCl3Cl,它们与肝细胞内大分子发生共价结合,引发活性氧自由基的产生和脂质过氧化,损伤肝细胞,从而导致贮脂细胞活化,释放出Ⅳ型胶原酶,降解Ⅳ型胶原。同时该细胞由合成分泌Ⅲ型胶原改为合成分泌Ⅰ型胶原,取代了Ⅳ型胶原,促使肝脏纤维化。TAA会延长肝细胞有丝分裂过程,并阻碍RNA从胞核到胞质的转移,影响依赖酶的代谢过程,导致肝细胞坏死,引起间质内结缔组织的生成增多。DMN经肝微粒体代谢为甲醛和甲烷ya硝胺,使核酸、蛋白质发生甲基化反应,随后导致肝细胞坏死或凋亡,细胞外基质进行性增加。

 

实验方法:

单纯CCl4诱导模型一般采用30%~50CCl4油溶液,给药途径有口服、腹腔注射及皮下注射,时间依给药途径和剂量不同,8周~4个月不等。所用动物包括大鼠、小鼠、家兔、犬、猴等。

 

大鼠:可用60CCl4橄榄油溶液以3ml/kg给雌性Sprague Dawley大鼠皮下注射,每周2次,共12周;或用液状石蜡配制15CCL溶液,按0.75ml/ kg腹腔注射,每周3次,共6周;用橄榄油将CCl4配成40%的溶液,首次按体重5ml/kg皮下注射,以后以3ml/kg注射,3天一次,共42天;30CCl4溶液20ml/kg,每周2次,共7周。

 

小鼠:40CCl4橄榄油4ml,一次性口服可诱发小鼠肝小叶中央坏死,CCl4油剂皮下注射13ml/kg,每周2次,肝硬化可在1215周形成。

 

家兔:模型用CCl4 12ml/kg一次性口服,可诱发兔肝小叶中央坏死,用CCl4 10ml/kg一次性口服,可诱发兔急性中毒性肝坏死。

 

犬:模型用CCl4溶液按12ml/kg,配以等量花生油,清晨空腹经腹腔注射,每周注射2次,共注药8周,形成肝硬化。

 

猫:模型用3ml/kg CCl4皮下注射,可诱发猫肝小叶中央坏死、脂肪肝。

 

复合CCl4诱导肝硬化模型:CCl4+乙醇+高脂肪饮食诱导肝硬化是目前较为常用的方法,大鼠皮下注射40CCl4(花生油以46配成,第1次用5ml/kg,以后每隔3天注射3ml/kg),采用高脂低蛋白食物(以玉米面为饲料,加0.5%胆固醇,实验第1周、2周加20%猪油)30%乙醇为唯一饮料,第6周末即可形成肝硬化。肝硬化形成后饲料中加入2%的氯化钠可制作肝硬化腹水模型。CCl4油溶液+乙醇灌胃+胆固醇低胆碱饲料:大鼠皮下注射40%~50CCl4油溶液(3ml/kg),每周2次。第2周开始,20%~30%乙醇隔1ml灌胃,并给予混有0.5%胆固醇低胆碱饲料喂养,连续8周,大鼠肝脏正常结构破坏,形成厚的纤维间隔,并分割形成假小叶。

 

TAA诱导模型:用生理盐水配成30%的TAA溶液,作为大鼠的饮用水,连续饮用8周可产生纤维化,17周产生肝硬化。亦可对小鼠进行腹腔注射。

 

DMN诱导模型:大鼠按10mg/kg剂量,生理盐水稀释的1DMN溶液腹腔注射,每周3次。

 

模型特点:

CCl4进入肝脏后引起肝小叶内中央肝静脉周围细胞坏死,引起纤维增生,而纤维增生以小叶内窦间隙为主,实验早期即可见明显的肝细胞损伤和炎症反应,CCl4复合造模法分期明确,第1周、2周以肝细胞变性坏死为主,3周、4周以弥漫性纤维增生为其特征,第5周、6周,纤维间隔、结节与假小叶形成。TAA溶液饮用诱导8周时会产生纤维化,17周时产生肝硬化,且各个体产生纤维化的程度相当。DMN诱导造模周期短,第21天可见胶原纤维沉积,胆管增生,大鼠死亡率低。

 

需确认的信息

1. 模型种属(大鼠还是小鼠或是其他种属)

2. 动物体重有无要求,年龄有无要求

3. 雌雄有无要求

4. 模型构建具体方案

5. 取材要求(采血、取组织样本)