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造模机制:
博来霉素(bleomycin)是一种多肽类抗肿瘤药物,其导致肺间质纤维化的机制主要是通过活性氧的作用。在博来霉素致肺损伤的早期,即肺泡炎阶段,产生大量氧自由基,对肺造成损伤。
实验方法;
1.大鼠:选用体重170~200g的Sprague Dawley大鼠。博来霉素(30mg/支),用0.9%氯化钠稀释成4g/L,气管内滴入博来霉素溶液0.25~0.3ml(5mg/kg),可建立肺间质纤维化模型。以2%戊巴bi妥钠(40mg/200g,即0.25ml/只)腹腔麻醉大鼠,约3~5分钟后,大鼠进入麻醉迟缓状态(如麻醉不深,须用乙mi加强)。麻醉后将其仰卧固定于鼠板,将四肢和头部固定,剪去颈毛。用聚维酮碘(碘伏)消毒皮肤,在无菌操作下切开长约1cm的颈中切口,逐层分离暴露气管(若室温低,须用保温措施)。用弯尖眼科钳经气管下方穿过,轻微抬起气管,尽量接过气管分叉处,抬高鼠板头端,使与桌面成30°~35°。选择1个7号的注射用针头,将针头用砂片磨成弧形,使其变得圆钝。在进针前用注射器试通注射针头,避免堵塞。进针时与水平面成150°,在两个环状软骨之间刺入。针孔方向面向术者,有落空感证明已刺进1~1.5cm,约到气管分叉处停止进针后注入博来霉素。注入博来霉素0.2ml(约4mg/kg),再向气管内注入0.2ml的空气2~3次,使药物在肺部分布均匀。以大鼠身体长轴为中心,正反快速旋转鼠板1~2分钟。缝合皮肤,局部聚维酮碘消毒(或用青霉素消毒)防止感染,室温保持在24~25℃,待动物自然清醒后置笼内常规饲养。
2.小鼠:选用体重18~20g的雄性昆明小鼠。氯an酮(100mg/2ml)腹腔注射(10mg/100g),将实验动物麻醉后仰卧,纵行切开皮肤,钝性分离暴露气管,用4号针头刺入气管,尽量接近气管分叉处,将0.05ml博来霉素缓慢滴入(博来霉素每支8mg,用前以生理盐水配制成0.2%药液),立即将动物直立旋转,使药液在肺内均匀分布,然后缝合皮肤,局部乙醇消毒防止感染。同样,也可选用雌性BLAB/C鼠,将小鼠腹腔注射水合氯.醛麻醉后固定于操作台,以动物喉镜压下小鼠舌根暴露声门,雾化器从声门插入气管并雾化注入博来霉素溶液100μl(5mg/kg)。
3.山羊:选用12~15kg的山羊,3%戊巴bi妥钠麻醉下通过球囊导管选择性地向左肺下叶支气管缓慢滴入博来霉素1.5~3.0U/kg,滴入液体总量按2~3ml/kg给予,滴注完毕后,将山羊左侧卧位30分钟,以利于药物的吸收和均匀分布,复制成肺间质纤维化模型。
需确认的信息:
1. 模型种属(大鼠还是小鼠或是其他种属)
2. 动物体重有无要求,年龄有无要求
3. 雌雄有无要求
4. 模型构建具体方案
5. 取材要求(采血、取组织样本)
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