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一、慢病毒简介
Lentivirus是逆转录病毒的一种,具有逆转录病毒的基本结构和特性;能整合入宿主细胞基因组,长期表达,可用于转基因动物制备;但也有不同于逆转录病毒的组分和特性;比逆转录病毒具有更高的滴度,不仅可以感染分裂细胞,更重要的是还能感染非分裂的细胞。
利用Lentivirus构建的shRNA表达载体,与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的shRNA相比,一方面可以替代后者,另一方面,Lentivirus-shRNA载体经包装系统包装后,可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞(如原代细胞、悬浮细胞等),并且在感染后可以整合到受感细胞的基因组,进行长时间的稳定表达,是制备稳定表达shRNA细胞株和进行体内实验(in vivo)的最有效手段。
二、慢病毒载体构建包装实验流程如下:
三、实验项目和实验周期:
目的基因过表达慢病毒颗粒制备 | |
项目 | 时间 |
1.慢病毒转导颗粒:2×108 TU (滴度1×108-1×109TU/ml) | 6-12个工作周 |
2. 慢病毒转导颗粒:5×108 TU (滴度1×108-1×109TU/ml) | 6-12个工作周 |
3. 慢病毒转导颗粒:1×109 TU (滴度1×108-1×109TU/ml) | 6-12个工作周 |
四、服务流程:
1、讨论分析实验方案
2、确定服务内容
3、签订服务合同
4、进行实验,定期向客户反馈
5、整理实验报告
6、完成合同内容
7、后续实验服务,进一步合作
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