免疫组化

应用免疫学基本原理，通过标记的特异性抗体（或抗原）对组织内抗原（或抗体）的分别进行组织和细胞原位检测，从而进行定位、定性及相对定量的研究。

实验意义

1. 免疫组织化学可应用于恶性肿瘤的病理诊断和科研工作。

2. 可与组织化学染色方法的形态学诊断相结合，提高疑难肿瘤的鉴别诊断的准确率，并为肿瘤进行进一步的病理分型。

3. 指导和提供临床治疗方案的选择。

实验步骤

1. 石蜡切片免疫组化：

①67℃烘箱烘片2小时，常规脱蜡至水，用pH 7.4的PBS冲洗三次，每次3 min；

②将切片置于沸腾的柠檬酸盐缓冲液中中档微波处理10 min，蒸馏水冲洗三次，PBS冲洗三次，每次3 min；

③3%H2O2室温孵育10 min阻断内源性过氧化物酶的活性，PBS冲洗三次，每次3 min；

④5~10%正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温孵育10 min，吸去血清后滴加稀释至适当比例的一抗，37℃孵育1-2 h或者4℃孵育过夜；

⑤PBS冲洗三次，每次3 min；⑤滴加稀释至适当比例的带标记二抗，37℃孵育10~30 min，PBS冲洗三次，每次3 min；

⑥滴加适当比例稀释的辣根酶标记物工作液，37℃孵育10~30 min，PBS冲洗三次，每次3 min；

⑦显色剂显色，自来水充分冲洗，复染细胞核，酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。

2. 冰冻切片免疫组化：

①新鲜组织立即在恒冷冰冻切片机内切片，厚度为5~6 μm；

②载玻片可不打底，裱片后立刻用电吹风吹干；

③染色前需用冷丙酮4℃固定10~20 min；

④PBS洗2次，每次5 min；

⑤3%H2O2灭活内源性过氧化物酶20 min，需避光处理；

⑥后续血清封闭与抗体孵育步骤与石蜡切片相似，最后脱水透明封片进行观察。

实验完成周期及交付标准

1. 实验周期：1-2周

2. 交付标准：蜡块、切片、染色图片、灰度值分析、柱状图、实验报告（实验步骤、试剂、仪器等）

需确认的信息

1. 样本的种属？

2. 样本类型（固定的组织or蜡块or切片）

3. 检测的目的蛋白

4. 是否提供一抗，公司可代购

5. 阳性率或者半定量分析要求

6. 拍照要求