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染色机制:
间苯二酚碱性品红与铁形成一种很深的色淀复合物,其游离的氨基与弹性纤维内的氢键牢固结合呈紫蓝色。该颜色不易脱色,并能很好保存。
染色应用:
弹力纤维广泛分布于身体各处,特别在动脉壁、肺泡壁和皮肤最为丰富。此法可以清楚地将组织内细小的弹力纤维显示出来。弹力纤维染色可以显示皮肤组织中弹力纤维的变化,如弹力纤维痣、皮肤环状肉芽肿、硬度病等;显示不判定心内膜及动脉的病变,观察某些病变中是击伴有弹力纤维的增生或破坏;还可鉴别肿瘤组织成分如弹力纤维瘤,经弹力纤维染色后,可清晰见到瘤体内弹力纤维球。
实验步骤
1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自来水洗。
2、氧化:酸化高孟酸钾(高孟酸钾:硫酸=1:1混合)氧化5min,自来水洗。
3、漂白:草酸溶液漂白1-2min,至无色,流水冲洗2min,95%的乙醇稍浸洗。
4、间苯二酚碱性品红染色:切片入间苯二酚品红染液中浸染并加盖,室温下3~4h,流水冲洗。
5、背景分化:盐酸酒精分化至无染液脱下,弹力纤维清晰的紫红色,背景淡紫或近乎无色。
6、复染VG:将饱和kuweisuan与酸性品红9:1混合成VG染液,染1-3min,快速水洗,无水乙醇三缸快速脱水。
7、透明封片:干净的二甲苯透明1-5min,中性树胶封片。
8、显微镜镜检,图像采集分析。
染色判读:
弹力纤维紫红色,胶原纤维红色,背景其他成分黄色。
注意事项:
VG复染过程中水洗要快,防止红色褪掉,无水乙醇也要快洗,防止黄色变暗。
染色结果:
弹力纤维呈紫色,胶原纤维呈红色,背景其他成分呈黄色。
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