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中性粒细胞提取

发布者:admin发布时间:2022-06-08浏览量:返回上级

一、实验所需材料:

1、中性粒细胞分离液(histopaque)

2、全血

3、Hanks液

4、离心管若干

5、离心机

6、移液管,移液抢

二、实验步骤

1. 将所有试剂放至室温。

2、用离心管收集全血1-2ml       

3、加等体积的Hanks液至全血中组成     

4、加2ml中性粒细胞分离液至装至离心管中。

5、将全血和Hanks液加入分离液中

6、4℃,900r/min离心8-10min血液此时应该分为6层:血浆、单核细胞层、分离液、中性粒细胞、其余的分离液、红细胞沉淀层。如果分层不是很明显,会导致分离的细胞不纯,则需要重复分离。

7、用吸管小心地移去上面的三层(血浆、单核细胞和分离液)

8、小心地吸取中性粒细胞层和其下面的分离液层,转移至一个干净的离心管中。

9、加Hanks液3ml,后4℃,900r/min离心8-10min,弃上清,留沉淀,重复2次。

10、如果细胞用来提RNA,可加Trizol 1ml保存。

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