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一、实验所需材料:
1、中性粒细胞分离液(histopaque)
2、全血
3、Hanks液
4、离心管若干
5、离心机
6、移液管,移液抢
二、实验步骤
1. 将所有试剂放至室温。
2、用离心管收集全血1-2ml
3、加等体积的Hanks液至全血中组成
4、加2ml中性粒细胞分离液至装至离心管中。
5、将全血和Hanks液加入分离液中
6、4℃,900r/min离心8-10min血液此时应该分为6层:血浆、单核细胞层、分离液、中性粒细胞、其余的分离液、红细胞沉淀层。如果分层不是很明显,会导致分离的细胞不纯,则需要重复分离。
7、用吸管小心地移去上面的三层(血浆、单核细胞和分离液)
8、小心地吸取中性粒细胞层和其下面的分离液层,转移至一个干净的离心管中。
9、加Hanks液3ml,后4℃,900r/min离心8-10min,弃上清,留沉淀,重复2次。
10、如果细胞用来提RNA,可加Trizol
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