软琼脂克隆：克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状

实验步骤

1. 获取样本，培养细胞，

2. 调整细胞悬液密度为1×103个/ml细胞。

3. 制备底层琼脂，完全溶化的5%琼脂和 37℃ 左右预温的新鲜完全培养液以1：9比例在 40℃ 均匀混合，加入培养皿（直径 60mm ）中，每皿含0.5%琼脂培养基2ml，室温下琼脂完全凝固。

4. 制备上层琼脂,37℃ 密度每皿含200个的细胞悬液1.5ml移入小烧杯中，加入 40℃ 、5%琼脂等体积混匀，即成0.25%半固体琼脂培养基。配好的半固体琼脂培养基立即加入铺有底层琼脂的培养皿中，室温下琼脂凝固。 37℃ 、5%CO2静置培养2-3周。

5. 当培养皿中出现肉眼可见克隆时，终止培养，弃去培养液，PBS液小心浸洗2次，空气干燥。甲醇固定15分钟，弃甲醇后空气干燥。用Giemsa染液染色10分钟，流水缓慢洗去染液，空气干燥。

实验周期及交付标准

1. 实验周期：1-2周

2. 交付标准：克隆形成图片、计数结果、柱状图、实验报告（实验步骤、试剂、仪器等）

细胞克隆化其他方法

1. 稀释铺板方法

2. 饲养层克隆法

3. 毛细管克隆法

4. 荧光激活分选法